Departamento de Anatomía Patológica, Médica Sur

Estudio de cariotipo o citogenético a partir de linfocitos de sangre periférica

• Generalidades:

Las alteraciones cromosómicas se clasifican en aquellas originadas por alteraciones en el número de cromosomas, o por alteraciones estructurales dentro de las que se incluye el síndrome de Down (trisomía 21), síndrome de Turner (45, X), síndrome de Klinefelter (47, XXY) entre otros. Se calcula que apróximadamente 1 de cada 150 recién nacidos presentan una alteración cromosómica. El análisis cromosómico o cariotipo se realiza a partir del cultivo de linfocitos de sangre periférica y una vez obtenido los cromosomas se realiza la técnica de tinción con Giemsa para realizar el análisis de bandas.

• Indicaciones en pacientes con:
  
  
  • Cuadro clínico compatible con alteración cromosómica (síndrome de Down, Turner, etc)
  • Malformaciones en estudio.
  • Talla baja en estudio.
  • Retraso psicomotor o mental en estudio.
  • Primaria o infertilidad.
  • Alteraciones de la diferenciación sexual.
  • Parejas con antecedentes de abortos recurrentes.
     
• Muestra requerida:

2 a 3 ml. de sangre periférica: obtenida en forma estéril a través de venopunción directa con jeringa con heparina o tubo Vacutainer con heparina (tapón verde). La muestra debe mantenerse a temperatura ambiente hasta su procesamiento, incluso puede realizarse de 2 a 3 días después de la toma (no debe refrigerarse).

• Tiempo de entrega: 3 semanas.

 

Estudio de cariotipo o citogenético a partir de células de líquido amniótico

• Generalidades:

Mediante esta prueba, se realiza el estudio cromosómico del feto a partir de células de líquido amniótico. A partir del cultivo de amniocitos, por medio de la técnica de bandeo con tinción con Giemsa y posteriormente se analizan los cromosomas al microscopio de luz. El análisis permite detectar alteraciones cromosómicas numéricas o estructurales.

• Indicaciones:
  
  
  • Edad materna mayor de 35 años.
  • Antecedente de hijos previos con alteraciones cromosómicas o malformados.
  • Un progenitor con antecedente de ser portador de una alteración cromosómica.
  • Presencia de malformaciones en el feto observadas por ultrasonido prenatal de alta resolución.
  • Marcadores prenatales bioquímicos alterados (triple o cuadruple marcador).
     
• Muestra requerida:

20ml. de líquido amniótico obtenido de manera estéril, la muestra debe conservarse a temperatura ambiente hasta su procesamiento, en caso de que la muestra se procese 2 a 3 días después de la toma debe mantenerse en refrigeración a 4ºC (nunca congelar).

• Tiempo de entrega: 15 días

 

Estudio de cariotipo o citogenético a partir de tejido de embrión

• Generalidades:

Las alteraciones cromosómicas, se clasifican en aquellas originadas por el número de cromosomas o estructurales, dentro de las que se incluye: el síndrome de Down (trisomía 21), síndrome de Turner (45, X), síndrome de Klinefelter (47, XXY) entre otros. Se calcula que aproximadamente el 50% de las pérdidas gestacionales espontáneas del primer trimestre se deben a alteraciones cromosómicas. El análisis cromosómico o cariotipo se realiza a partir de tejido considerado al microscopio como vellosidades coriales y membranas fetales y una vez obtenido los cromosomas se lleva a cabo la técnica de tinción con Giemsa para el análisis de bandas. Dadas las características del tejido a partir del cual se realiza el cultivo, en ocasiones no hay crecimiento del mismo y no es posible el análisis citogenético, en dichos casos se recomienda la realización del análisis cromosómico en la pareja a partir de linfocitos de sangre periférica.

• Indicaciones:

Pérdida gestacional del primer trimestre.

• Muestra requerida:

2 a 3 cc de vellosidades coriales o tejido embrionario. Debe colocarse en un frasco estéril con solución fisiológica también estéril, la muestra debe mantenerse en refrigeración a 4ºC hasta su procesamiento que incluso puede realizarse 2 a 3 días después de la toma (nunca congelar).

• Tiempo de entrega: 4 a 5 semanas.
  Se notificará dos semanas después de su procesamiento en caso de que no haya crecimiento del tejido.

 

Estudio de cariotipo o citogenético a partir de médula ósea en padecimientos mieloproliferativos

• Generalidades:

Como parte del abordaje diagnóstico y de tratamiento, recientemente se ha considerado importante realizar el análisis cromosómico o citogenético en pacientes pediátricos o adultos con alteraciones mieloproliferativas. La identificación de una alteración cromosómica numérica o estructural clonal, dependiendo del padecimiento mieloproliferativo, permite definir un pronóstico así como el tratamiento a realizar en estos pacientes. El estudio de citogenética se realiza una vez obtenidos los cromosomas a partir de una cosecha directa y después de un cultivo celular de 72 horas.

• Indicaciones:

Pacientes pediátricos o adultos con padecimientos mieloproliferativos (leucemias, linfomas, etc).

• Muestra requerida:

2 a 3 ml. de médula ósea tomada directamente con una jeringa heparinizada. La muestra debe mantenerse a temperatura ambiente hasta su procesamiento (no debe refrigerarse ni congelarse).

• Tiempo de entrega: 2 semanas

 

Análisis molecular del síndrome de X frágil

• Generalidades:

El tamizaje del síndrome de X frágil se realiza en varones con retraso mental. La frecuencia estimada del síndrome de X frágil es de 1 en 4000 varones, además se considera que una tercera parte de los casos de varones con retraso mental con antecedentes familiares sugestivos de herencia ligada al X son en realidad causados por el síndrome de X frágil.

El estudio molecular analiza la mutación por expansión de repetidos CGG mediante la técnica de PCR, la cual está presente en el 95% de los pacientes con X frágil, si el resultado es positivo, lo que indica que existe una mutación por expansión de repetidos CGG, previo a brindar asesoramiento genético, el resultado de PCR debe confirmarse mediante la técnica de Southern Blot. La identificación de mujeres afectadas o portadoras de este padecimiento no puede realizarse mediante la metodología de PCR sino mediante Southern Blot.

• Indicaciones, en pacientes masculinos con retraso psicomotor o mental:
  
  
  • De causa no determinada sin antecedentes familiares.
  • Con antecedentes familiares de retraso mental en varones por rama materna.
  • Con manifestaciones clínicas de X frágil (cara alargada, pabellones auriculares grandes, prognatismo o macrorquídia).
  • Con datos de autismo.
     
• Muestra requerida:
1. 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento.
2. Muestra de raspado de mucosa oral con cepillo de citología exfoliativa y depositado en un microtubo con solución de transporte especial (previo a tomar la muestra contactarnos para proporcionarles la solución de transporte), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
• Tiempos de entrega: 2 a 3 semanas.

 

Diagnóstico molecular de distrofia muscular tipos Duchenne/Becker

• Generalidades:

Las distrofias musculares de Duchenne y Becker son condicionadas por mutaciones en el gen DMD/DMB localizado en el brazo corto del cromosoma X. Mediante la técnica de PCR múltiple se analizan 22 exones del gen DMD/DMB (Pm1, 3, 6, 8, 12, 13, 16, 17, 19, 43, 44, 45, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 y 60), para la detección de deleciones presentes en el 50-60% de los pacientes con distrofinopatía. La identificación permite la evaluación de dosis génica en mujeres emparentadas al caso índice y en riesgo de ser portadoras de DMD/DMB; lo que permite determinar si la mutación se originó como evento de novo (madre no portadora) o se trata de un caso familiar (madre portadora de DMD/DMB).

• Indicaciones:
  
  
  • Pacientes masculinos con sospecha clínica y de laboratorio de distrofia muscular de Duchenne (elevación de CPK, electromiografía con datos compatibles con miopatía).
  • Detección de portadoras en mujeres emparentadas con varones afectados (se requiere el análisis molecular en un varón afectado previo a la identificación de portadoras).
  • Diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la deleción responsable de DMD/DMB.
     
• Muestra requerida:

Enviar cualquiera de las siguientes de acuerdo a la indicación del estudio.

1. 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer,  tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento (varones afectados o mujeres emparentadas para identificación de portadoras).
2. Bloque de biopsia embebido en parafina, en pacientes que hayan fallecido con diagnóstico de distrofia muscular de Duchenne/Becker.
3. 5 ml. de líquido amniótico para realizar diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la deleción responsable en el gen DMD/DMB, la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 3 días previo a su procesamiento.
• Tiempo de entrega: 2 a 3 semanas (diagnóstico prenatal 3 a 5 días).

 

Diagnóstico molecular de atrofias músculo-espinales tipos I (síndrome de Werdnig-Hoffman), II y III.

• Generalidades:

La atrofia músculo-espinal tipo I (SMA-1) o síndrome de Werdnig-Hoffmann, se considera la segunda entidad letal con herencia autosómica recesiva más frecuente en población europea. Asimismo, se considera como la principal entidad degenerativa, hereditaria y mortal más común por afección de motoneuronas en la etapa pediátrica. El estudio molecular identifica la mutación por deleción de los exones 7 y 8 en el gen SMN-1 presente en el 95-98% de los pacientes con SMA-1 en estado homocigoto, existen al menos otras dos entidades alélicas ligadas al locus SMA, las cuales tienen un cuadro clínico con menor severidad, denominadas SMA-II y SMA-III, en las cuales la deleción de los exones 7 y 8 en el gen SMN-1 se observan en el 75% y 85% en estado homocigoto respectivamente.

• Indicaciones:
  
  
  • Pacientes con síndrome hipotónico o con datos clínicos o electromiográficos de neurona motora inferior.
  • Diagnóstico prenatal en familias en las que se haya identificado la deleción de los exones 7 y 8 en el gen SMN-1.
     
• Muestra requerida:

 Enviar cualquiera de las siguientes de acuerdo a la indicación del estudio:

1. 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento.
2. Muestra de raspado de mucosa oral con cepillo de citología exfoliativa y depositado en un microtubo con solución de transporte especial (previo a tomar la muestra contactarnos para proporcionarles la solución de transporte), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
3. Bloque de biopsia embebido en parafina, en pacientes que hayan fallecido con diagnóstico de atrofia músculo espinal.
4. 5 ml. de líquido amniótico para realizar diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la deleción de los exones 7 y 8 del gen SMN-1, la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 3 días previo a su procesamiento
• Tiempos de entrega: 2 a 3 semanas (diagnóstico prenatal en 3 a 5 días).

 

Análisis molecular de fibrosis quística

• Generalidades:

La fibrosis quística es la entidad autonómica recesiva más frecuente dado que se observa en uno de cada 2500 recién nacidos. A la fecha se han descrito más de 1300 mutaciones en el gen FQ responsable de fibrosis quística, en el presente estudio molecular se realiza la técnica de mutagénesis sitio-dirigida mediante PCR y ensayo de restricción, con la finalidad de identificar las cuatro mutaciones presentes en el 45-50% de los cromosomas FQ en México (deltaF508, G542X, deltaI507, N1303K).

• Indicaciones:
  
  
  • Recién nacidos, que en su tamiz neonatal indique tripsinógeno elevado.
  • Pacientes con datos clínicos sugerentes de fibrosis quística (historia de íleo meconial, insuficiencia pancreática exócrina, infecciones respiratorias recurrentes).
  • Determinación de cloruros en sudor alterada (>60mEq/l).
  • Identificación de portadores en padres y hermanos de pacientes en quienes se haya observado  la mutación responsable en el gen FQ.
  • Diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la mutación responsable en el gen FQ.
     
• Muestra requerida:

Enviar cualquiera de las siguientes de acuerdo a la indicación del estudio.

1. 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer o tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento (para análisis de mutaciones en pacientes o para la identificación de portadores).
2. Muestra de raspado de mucosa oral con cepillo de citología exfoliativa y depositado en un microtubo con solución de transporte especial (previo a tomar la muestra contactarnos para proporcionarles la solución de transporte), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento (para análisis de mutaciones en pacientes o para la identificación de portadores).
3. Bloque de biopsia embebido en parafina, en pacientes que hayan fallecido con diagnóstico de fibrosis quística.
4. 5 ml. de líquido amniótico para realizar diagnóstico prenatal en familias en donde se haya identificado la mutación responsable en el gen FQ.
• Tiempos de entrega: 2 a 3 semanas (diagnóstico prenatal en 3 a 5 días).

 

Análisis molecular del rearreglo bcr/abl (translocación 9;22) en leucemias

• Generalidades:

La translocación t (9;22) (q34;q11) (bcr/abl) o cromosoma Philadelphia, es un rearreglo cromosómico que inicialmente fue identificado en la mayoría de los pacientes con leucemia mieloide crónica, sin embargo estudios posteriores han revelado que dicho rearreglo se encuentra presente en otros tipos de leucemias, como las agudas linfoblásticas. Se considera que un 3-5% de las leucemias linfoblásticas agudas con inmunofenotipo pre-B de la  etapa pediátrica son Philadelphia positivas. Asimismo, del 30-40% de las leucemias agudas linfoblásticas del adulto presentan la translocación t(9;22) (q34;q11).

Recientemente se ha considerado importante realizar la detección del rearreglo bcr/abl como parte del abordaje diagnóstico en leucemias linfoblásticas de la etapa pediátrica, dado que es un rearreglo asociado a un pronóstico desfavorable, que obliga a brindar esquemas terapéuticos más agresivos o incluso el considerar el trasplante de médula ósea. Otra ventaja del análisis molecular del rearreglo bcr/abl, es la valoración de enfermedad mínima residual, dado que esta prueba permite identificar una célula neoplásica en 109 células normales, lo cual representa una sensibilidad superior a cualquier otra metodología diagnóstica convencional e incluso de estudios de citogenética molecular o FISH.

A partir de la muestra de sangre periférica o médula ósea, se realiza la extracción del RNA total. Posteriormente el RNA es sometido a reverso-transcripción (conversión de RNA a DNA) y PCR convencional. El ensayo detecta los tres posibles RNA mensajeros o transcritos quiméricos derivados de la fusión de los protooncogenes del tipo cinasas BCR y ABL, localizados en el cromosoma 9 y 22 respectivamente, que son:

• b2a2: fosfoproteína p210. Presente en leucemia granulocítica crónica.
• b3a2: fosfoproteína p210. Presente en leucemia granulocítica crónica.
• e1a2: fosfoproteína p190. Frecuente en leucemias agudas linfoblásticas.
• Indicaciones:

Diagnóstico, clasificación y seguimiento de pacientes de cualquier edad con leucemias agudas linfoblásticas o mieloides crónicas, especialmente aquellos que son candidatos a trasplante o a tratamiento con inhibidores de tirosín-cinasa (mesilato de imatinib).

• Muestra requerida:

1-3 ml. de sangre periférica o médula ósea con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, o  tapón lila o de biometría hemática). La muestra nunca debe tener contacto con heparina. Conservar en frío hasta su procesamiento (enviar lo más pronto posible, aunque puede mantenerse máximo 3 días a 4°C).

• Tiempo de entrega: 3 a 5 días.

 

Análisis molecular del rearreglo tel/aml1 (translocación 12;21) en leucemias

• Generalidades:

La translocación t(12;21) (p13;q22) (TEL/AML1) es uno de los cuatro rearreglos cromosómicos más frecuentemente asociados a leucemias agudas linfoblásticas de la infancia. La t(12;21) se detecta en el 20-25% de las leucemias agudas linfoblásticas de estirpe pre-B de la infancia (2-12 años) y se le considera un marcador molecular de buen pronóstico o de respuesta favorable a tratamiento. Cabe mencionar que la t(12;21) es un rearreglo cromosómico críptico, es decir que no puede ser evidenciado mediante estudios de citogenética convencional (cariotipo), por lo que para su caracterización, se emplean técnicas moleculares como la RT-PCR que detecta la presencia o ausencia del transcrito quimérico TEL/AML1. La t(12;21) rara vez se encuentra presente en pacientes adultos con leucemias aguda linfoblásticas, mieloblásticas y en aquellas linfoblásticas de estirpe T o que aparecen antes del año de edad.

Recientemente, se ha considerado importante realizar la detección del rearreglo TEL/AML1 como parte del abordaje diagnóstico en leucemias linfoblásticas de la etapa pediátrica, dado que es un rearreglo cromosómico fuertemente asociado a un pronóstico favorable. Otra ventaja del análisis molecular del rearreglo TEL/AML1, es la valoración de enfermedad mínima residual, dado que esta prueba permite identificar una célula neoplásica en 106-9 células normales, lo cual representa una sensibilidad superior a cualquier otra metodología diagnóstica convencional o de citogenética molecular (FISH).

A partir de la muestra de sangre periférica o médula ósea, se realiza la extracción del RNA total. Posteriormente el RNA es sometido a reverso-transcripción (conversión de RNA a DNA) y PCR convencional. El ensayo detecta el RNA mensajero o transcrito quimérico derivados de la fusión de TEL/AML1, localizados en el cromosoma 12 y 21 respectivamente.

• Indicaciones:

Clasificación y seguimiento de pacientes pediátricos con diagnóstico de leucemia aguda linfoblástica.

• Muestra requerida:

1-3 ml. de sangre periférica o médula ósea con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer,  tapón lila o de biometría hemática). La muestra nunca debe tener contacto con heparina. Conservar en frío hasta su procesamiento (enviar lo más pronto posible, aunque puede mantenerse máximo 3 días a 4°C).

• Tiempo de entrega: 3 a 5 días.

 

Detección de quimerismo hematológico post-trasplante mediante perfil de DNA

• Generalidades:

El trasplante de células hematopoyéticas progenitoras (CPH) se ha posicionado como una opción de terapia curativa para pacientes con trastornos hemato-oncológicos, inmunológicos y metabólicos. La valoración del éxito en el trasplante de CPH depende en gran medida de parámetros clínicos y de laboratorio, y dentro de estos últimos la evaluación del perfil de DNA ha demostrado ser una prueba altamente sensible y específica para el seguimiento del injerto. La determinación del perfil de DNA se basa en que dos individuos presentan una estructura genética irrepetible, aún cuando estos individuos sean familiares. Así, cuando un paciente recibe un trasplante de CPH de donador relacionado (HLA-idéntico o haploidéntico) o no relacionado, es posible identificar con certeza el perfil de DNA de las células injertadas tanto en aspirados de médula ósea, como en sangre venosa periférica. A esta condición se le denomina quimerismo hematológico.

El perfil de DNA para valoración del quimerismo post-trasplante analiza secuencias denominadas repetidos cortos en tándem o STRs. Los STRs muestran un alto grado de variabilidad o polimorfismo entre individuos, lo cual permite distinguir con certeza las células del donador y del receptor, incluso aún cuando son familiares. La mayoría de los STRs analizados se localizan en cualquiera de los 22 autosomas, sin embargo se cuenta también con STRs del cromosoma Y, cuyo análisis es de gran sensibilidad en la valoración de microquimerismo cuando el donador es del sexo masculino y el receptor del sexo femenino.

• Indicaciones:

Determinación y seguimiento periódico del trasplante de médula ósea o con células progenitoras hematopoyéticas derivadas de unidades de cordón umbilical en pacientes post-trasplantados con entidades hemato-oncológicas, metabólicas o con inmunodeficiencias.

• Muestras requeridas:
  
  
  1. Muestra de sangre periférica o de médula ósea del receptor (1-3 ml.) colectada en tubos Vacutainer con EDTA (tapón lila), nunca con heparina, o muestra de mucosa oral (se les proporciona cepillos estériles de citología y microtubos con solución de transporte). Las muestras de sangre periférica, médula ósea o mucosa oral son estables por una semana almacenadas a 4º C (no congelar).
  2. Muestra de sangre periférica del donador (1-3 ml.) colectada en tubos Vacutainer o con EDTA (tapón lila), nunca con heparina, o muestra de mucosa oral (se les proporciona cepillos estériles de citología y microtubos con solución de transporte). Las muestras de sangre periférica, médula ósea o mucosa oral son estables por una semana almacenadas a 4º C (no congelar).
  3. Si se usan CPH de unidades de cordón umbilical en el trasplante, favor de enviar de 0.5 - 2 ml. de la unidad colectada en tubos Vacutainer con EDTA (tapón lila), nunca con heparina. Las muestras de sangre de cordón umbilical son estables por una semana almacenadas a 4º C (no congelar).
  4. En ocasiones cuando el paciente ya ha sido trasplantado y no se cuenta con muestra del donador (en especial cuando se usan unidades de cordón umbilical), aún así es posible establecer el quimerismo hematológico a través de la comparación del perfil de DNA de una muestra autóloga y avascular (mucosa oral) y el perfil de DNA de una muestra de células sanguíneas circulantes. En este caso, favor de enviar una muestra de sangre periférica del receptor (1-3 ml.) colectada en tubos Vacutainer con EDTA (tapón lila) nunca con heparina, y una muestra de mucosa oral (se les proporciona cepillos estériles de citología y microtubos con solución de transporte). Las muestras de sangre periférica, médula ósea o mucosa oral son estables por una semana almacenadas a 4º C (no congelar).
• Tiempo de entrega: 1 a 2 semanas.

 

Determinación de la paternidad biológica mediante perfil de DNA

• Generalidades:

La determinación de la paternidad biológica mediante el perfil de DNA, se basa en el estudio de secuencias de DNA de localización y estructura conocidas presentes dentro del genoma humano, conocidas como polimorfismos del tipo STR’s (del inglés, "shot tandem repeats"). Dichas secuencias son altamente variables o polimórficas entre los seres humanos y su estudio constituye la prueba por excelencia para confirmar o excluir con certeza la paternidad biológica. La prueba inicia con la obtención del material genético de los involucrados a partir de sangre periférica o células de descamación de mucosa oral. El DNA genómico de los involucrados se somete de manera simultánea al análisis de 12 a 16 marcadores STR autosómicos mediante la reacción en cadena de la polimerasa o PCR y su subsecuente análisis electroforético. Si no se cuenta con algún progenitor, aún así se puede establecer la relación de parentesco entre padre e hijo o madre e hijo. Una vez obtenida la constitución genética de cada uno de los integrantes, se comparan los sitios estudiados, bajo la premisa de que cada progenitor hereda forzosamente el 50% de su constitución genética a su descendencia.

La prueba también permite analizar muestras obtenidas post-mortem (restos óseos, tejidos de exhumaciones, tejidos embebidos en parafina, conservados en formol u otros fijadores, tejidos congelados, etc.).

• Indicaciones:

Prueba que confirma o excluye certeramente la paternidad biológica.

• Muestras requeridas:

1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, tapón lila o de biometría hemática) o muestra de mucosa oral por exfoliación con cepillo de citología exfoliativa y depositado en un microtubo con solución de transporte especial (proporcionada) de cada uno de los individuos sometidos a la prueba (supuesto padre – supuesto hijo o supuesto padre, supuesto hijo y madre).

En su caso, de 1-2 cm3 de los tejidos antes citados.

• Tiempos de entrega: 2 a 3 semanas.

 

Identificación de individuos mediante el perfil de DNA

• Generalidades:

Estas pruebas se basan en el estudio de secuencias de ADN de localización y estructura conocidas presentes dentro del genoma humano, conocidas como polimorfismos del tipo STR’s (del inglés, secuencias cortas repetidas en tándem). Dichas secuencias son altamente variables o polimórficas entre los seres humanos, por lo que se asevera que ningún ser humano es genéticamente idéntico a otro; con ello, es posible identificar inequívocamente la procedencia genética de cualquier muestra biológica (manchas de sangre, restos óseos, líquido seminal, etc.) dentro del estudio forense. Existen numerosos sitios STR’s distribuidos en el genoma nuclear, pero para brindar un resultado confirmatorio de asignación/exclusión del origen de la muestra en cuestión se requiere que a cada uno de los involucrados se les estudien los mismos sitios STR’s. Una vez obtenida la constitución genética de cada uno de los integrantes, se comparan los sitios estudiados, bajo la premisa de que cada individuo presenta una constitución genética irrepetible.

Las secuencias estudiadas dentro de la prueba del perfil de DNA son de 12-16 marcadores STR de localización autosómica o 5-7 marcadores del cromosoma (en muestras forenses con mezclas de DNA femenino y masculino, como las encontradas en casos de violaciones).

• Indicaciones:

Determinación del origen de muestras biológicas de tipo forense (restos óseos, exhumaciones, líquido seminal en violaciones y manchas de sangre) o médico (tejidos embebidos en parafina, biopsias u otras preparaciones histológicas como laminillas o improntas).

• Muestras requeridas:

Cualquiera de las muestras biológicas indicadas y 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, tapón lila o de biometría hemática) del individuo al cual se requiere establecer la pertenencia de dicha muestra.

• Tiempo de entrega: 2 a 3 semanas.

 

Diagnóstico molecular de microdeleciones de regiones controladoras de la espermatogénesis en el cromosoma "Y"

• Generalidades:

Dentro de las causas genéticas de esterilidad masculina, se encuentran las denominadas microdeleciones del brazo largo del cromosoma, donde se localizan los genes controladores y de mantenimiento de la espermatogénesis. Dado que estas deleciones son crípticas y no se detectan en el estudio citogenético de alta resolución, actualmente se realiza el análisis molecular mediante la técnica de PCR múltiple, la cual amplifica selectivamente 18 regiones STS (correspondientes a los loci AZFa, AZFb, AZFc y AZFd). El estudio se recomienda realizar en pacientes masculinos con infertilidad debida a azoospermia, olgospermia y/o teratospermia de etiología no determinada y con cariotipo 46, XY normal.

• Indicaciones:

Pacientes masculinos con azoospermia, oligospermia o teratospermia de etiología no establecida y candidatos a técnicas de fertilización asistida (por ejemplo ICSI).

• Muestra requerida:

1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer o tapón lila o de biometría hemática) NUNCA CON HEPARINA, o muestra de mucosa oral (se les proporciona cepillos estériles de citología y microtubos con solución de transporte). Las muestras de mucosa oral o sangre se pueden conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar) hasta por una semana previo a su procesamiento.

• Tiempo de entrega: 2 a 3 semanas.

 

Diagnóstico molecular del alelo de Leiden del factor V y del alelo G20210a del factor II de la coagulación sanguínea

Dentro de los factores genéticos identificados en trombofilias, destacan el alelo Leiden del gen del factor V y la mutación G20210A del gen de protrombina. Así, se sabe que los individuos que presentan una copia (heterocigotos) para el alelo Leiden del factor V presentan 7-8 veces más riesgo de presentar trombosis venosa profunda, mientras que en los individuos homocigotos (dos copias con el alelo Leiden), el riesgo se incrementa a más de 70 veces. La hipercoagulabilidad de los individuos portadores del alelo Leiden se atribuye a una resistencia a la acción anticoagulante de la proteína C activada. Por otro lado, la mutación G20210A del gen de protrombina se ha asociado a una elevación de la concentración media de protrombina plasmática. Los individuos heterocigotos para dicha mutación presentan de 3 a 7 veces más riesgo de desarrollar trombosis venosa profunda. Cabe mencionar, que el riesgo relativo para el desarrollo de trombosis venosa profunda (y eventualmente tromboembolia pulmonar) asociada a embarazo o a ingesta de anticonceptivos orales en mujeres heterocigotas para el alelo Leiden, es de 35 y en homocigotas de 100. Otras condiciones asociadas al alelo de Leiden, son enfermedad hipertensiva del embarazo, pérdidas gestacionales recurrentes de etiología no determinada, retraso del crecimiento intrauterino y desprendimiento prematuro de placenta.

El análisis de los genotipos para el gen del factor V y II de la coagulación, se realiza mediante la técnica de mutagénesis dirigida por PCR tipo dúplex.

• Indicaciones:
  
  
  • Pacientes de ambos sexos, con antecedentes de trombosis venosa (pulmonar, cerebral, mesentérica, etc.) con o sin factores de riesgo asociados.
  • Pacientes femeninos con antecedentes personales o historia familiar de trombosis venosa asociada al uso de contraceptivos orales, terapia hormonal de reemplazo, embarazo y/o puerperio.
     
• Muestra requerida:

Enviar cualquiera de las siguientes opciones.

1. 1-3 ml. de sangre periférica con anticoagulante EDTA (tubo Vacutainer, tapón lila o de biometría hemática), la muestra se puede conservar en refrigeración a 4ºC (no congelar), incluso por 2 a 3 días previo a su procesamiento.
2. Muestra de raspado de mucosa oral con cepillo de citología exfoliativa y depositado en un microtubo con solución de transporte especial (previo a tomar la muestra contactarnos para proporcionarles la solución de transporte), la muestra se puede conservar a temperatura ambiente por 8 días previo a su procesamiento.
• Tiempos de entrega: 2 a 3 semanas.